ГЛАВНАЯ ЖУРНАЛЫ СОБЫТИЯ ИЗДАНИЯ КОНГРЕСС О НАС КОНТАКТЫ  

КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ЭМБРИОНОВ В СРЕДЕ, СОДЕРЖАЩЕЙ ГРАНУЛОЦИТАРНО-МАКРОФАГАЛЬНЫЙ КОЛОНИЕСТИМУЛИРУЮЩИЙ ФАКТОР (GM-CSF) У ПАЦИЕНТОК С ПРЕДЫДУЩИМИ НЕУДАЧНЫМИ ПОПЫТКАМИ ВРТ В АНАМНЕЗЕ
 
С. И. Тевкин, М. С. Шишиморова, Н. М. Джусубалиев, В. Е. Полумисков

Институт Репродуктивной Медицины, Центр «ЭКО», г. Алматы (Казахстан)

Резюме


Применение в практике лабораторий ЭКО современных методик, позволяет повысить шансы пациентов как на положительный исход каждого из этапов программ ВРТ, так и на результативность лечения в целом. В репродуктивном тракте женщины эмбрионы находятся в естественной физиологической среде, содержащей различные цитокины и факторы роста, которые играют важную роль в регуляции нормального эмбрионального развития, улучшения имплантации и, в последующем, оптимизации развития плода и плаценты. GM-CSF – один из цитокинов, играющих важную роль в обеспечении репродуктивной функции. Добавление в культуральную среду рекомбинантного GM-CSF приближает культивирование эмбрионов человека in vitro к естественным условиям, и положительно сказывается на эффективности проведения циклов ВРТ. Сравнительный анализ развития эмбрионов в среде EmbryoGen с добавлением рекомбинантного GM-CSF показал, что оплодотворение, культивирование и перенос эмбрионов у пациенток с предыдущими неудачными попытками ВРТ в анамнезе увеличивает частоту наступления клинической беременности по сравнению с контролем и составляет 39,1% против 27,8%, соответственно. Отмечено, что частота имплантации (7 нед. гестации) и частота прогрессирующих клинических беременностей (12 нед. гестации) были достоверно выше в группе культивирования эмбрионов в среде EmbryoGen, по сравнению со стандартной комбинацией сред (ISM1+ВА) и составили 20,4% и 17,4% против 11,6% и 9,1%, соответственно.

Summary


The application in IVF practice of modern techniques can improve positive outcome of each cycle in ART programs and the effectiveness of treatment as a whole. There are embryos in the female reproductive tract in physiological medium which contain various cytokines and growth factors. It plays an important role in the regulation of normal embryonic development improve implantation and subsequently optimizing the development of the fetus and the placenta. GM-CSF is one of the cytokines playing an important role in reproductive function. Addition of recombinant GM-CSF to the culture medium can makes closer human embryos culture to in vivo conditions and improve the efficacy ART cycles. The analysis of culture embryos in EmbryoGen medium has shown that fertilization rate embryo culture and transfer to patients with previous unsuccessful attempts increases clinical pregnancy rate compared to the control group 39.1% vs. 27.8 %, respectively. It is noted that the implantation rate (on 7 weeks gestation) and progressive clinical pregnancy rate (on 12 weeks gestation) were significantly higher in group embryos culture in EmbryoGen medium compared to standard combination of medium (ISM1 + VA), and were 20.4% 17.4% vs. 11.6% and 9.1%, respectively.

Ключевые слова: культивирование эмбрионов, цитокины, GM-CSF, оплодотворение in vitro, имплантация.
Keywords: embryo culture, cytokines, GM-CSF, in vitro fertilization, implantation.


Введение


Повышение эффективности методов вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) является актуальной задачей для множества специалистов, занятых в лечении бесплодия. Применение в практике лабораторий ЭКО современных методик, позволяет повысить шансы пациентов как на положительный исход каждого из этапов программ ВРТ, так и на результативность лечения в целом. Однако, несмотря на развитие методик ВРТ, частота имплантации в программах ЭКО/ИКСИ все еще остается низкой.

Даже при переносе морфологически качественного эмбриона в эндометрий, структурно соответствующий фазе менструального цикла, не всегда достигается желанная беременность, а наступившая беременность в ряде случаев прекращает свое развитие на ранних сроках. По данным литературы частота прерывания беременности при лечении бесплодия составляет 15 – 20%, из них 80% приходится на ранние доклинические потери беременности [3,5].

Повторные неудачи имплантации (recurrent implantation failure) определяются как проведение от 2 до 6 неэффективных циклов ЭКО, в результате которых в полость матки суммарно были подсажены более 10 эмбрионов хорошего качества, а также результат переноса 8-ми эмбрионов или 4-х бластоцист хорошего качества в нескольких циклах ЭКО/ИКСИ. Причинами этого могут быть сочетанные факторы, сниженная рецептивность эндометрия или генетические дефекты эмбриона.

Доля пациентов с неоднократными неудачными попытками ВРТ составляет порядка 30% всех программ при лечении бесплодия [6,8,11,23].
По мнению большинства исследователей, повышение эффективности существующих и разработка новых методов лечения бесплодия невозможны без изучения механизмов регуляции имплантации эмбрионов, как одного из наиболее сложных аспектов в репродукции человека. Имплантация эмбриона является многоэтапным процессом, регуляция которого осуществляется путем межмолекулярных и межклеточных взаимодействий, а успех во многом зависит от синхронности развития эмбриона и эндометрия, что возможно только при условии открытого «окна имплантации».

В результате их взаимодействия продуцируются факторы роста и цитокины, осуществляющие паракринную, аутокринную и эндокринную регуляцию этого процесса. Эти взаимодействия модулируют дальнейшее развитие и поведение эмбриона, а также распознавание беременности и адаптацию к ней организма матери [4,10,23,33].

В репродуктивном тракте женщины эмбрионы находятся в естественной физиологической среде, содержащей различные цитокины и факторы роста, которые играют важную роль в регуляции нормального эмбрионального развития, улучшения имплантации и, в последующем, оптимизации развития плода и плаценты [13,14]. Дефицит и нарушение секреции различных цитокинов: GM-CSF, CSF-1, IL-1, IL-4, IL-6, TNF-a, TNF-b может приводить к снижению жизнеспособности эмбрионов и патологии плаценты, и как следствие, неблагоприятные исходы беременности: неудачи имплантации и ранние доклинические потери беременностей [15,16,17,24,25].

Среды, используемые для культивирования эмбрионов человека in vitro, лишены ростовых факторов. В результате этого возможна задержка эмбрионов в развитии, увеличение уровня аномалий и апоптоза, что в дальнейшем может сказаться на частоте наступления клинической беременности, имплантации, прерываний и патологий беременности [9,18,19,26].

Результатом многочисленных исследований различных факторов роста, в качестве кандидатов на добавление в культуральные среды стал гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (GM-CSF). GM-CSF – один из цитокинов, играющих важную роль в обеспечении репродуктивной функции. Он способствует нормальному развитию эмбриона, росту и дифференцировке трофобласта и внутриклеточной массы, принимает участие в регуляции процесса имплантации и иммунного ответа материнского организма [20,29,32,34,35].

Показано, что GM-CSF синтезируется клетками фолликулов, эпителием фаллопиевых труб и эндометрия [21]. После попадания эякулята в репродуктивный тракт, а также во время оплодотворения и имплантации, наблюдается увеличение секреции GM-CSF в женском репродуктивном тракте [31,34,35]. У здоровых женщин с наступлением беременности уровень экспрессии GM-CSF в сыворотке крови резко повышается, а при невынашивании его концентрация существенно ниже [27].

Таким образом, результаты исследований ростовых факторов показали, что добавление в культуральную среду EmbryoGen рекомбинантного GM-CSF приближает культивирование эмбрионов человека in vitro к естественным условиям и положительно сказывается на эффективности проведения циклов ВРТ [28,32,36].

Цель исследования


Провести сравнительный анализ эффективности культивирования эмбрионов человека в среде EmbryoGen содержащей GM-CSF по частоте наступления клинической беременности, имплантации и частоте ранних потерь беременностей у пациенток с предыдущими неудачными попытками ВРТ в анамнезе.

Материалы и методы


В исследовании были проанализированы данные 197 циклов пациентов, проходивших лечение в рамках программ ЭКО/ИКСИ с января 2012 по июнь 2013 года в Центре «ЭКО» Института Репродуктивной Медицины (ИРМ) г. Алматы. Число циклов в опытной группе составило 46, в контрольной – 151. Возраст пациенток, вошедших в исследование 26-46 лет. Критерии отбора включали: предыдущие неудачные попытки ВРТ в анамнезе, спонтанное прерывание беременности, идиопатическое и эндокринное бесплодие, трубный фактор.

Индукцию суперовуляции проводили стандартными схемами стимуляции: длинные и короткие протоколы с агонистами ГнРГ или короткие протоколы с антагонистами ГнРГ, в которых применяли обычные стартовые и курсовые дозы гонадотропинов в соответствии с фолликулярным резервом и возрастными данными. В качестве триггера овуляции назначали хорионический гонадотропин человека (ХГЧ), рекомбинантный ХГЧ или аналог гонадотропин-релизинг гормона. Для получения ооцитов, через 36-38 ч после триггера овуляции, под контролем УЗИ яичников проводили трансвагинальную пункцию (ТВП) фолликулов с аспирацией их содержимого.

Исследование основывалось на сравнении эффективности культивирования эмбрионов человека в среде EmbryoGen® с добавлением 2 нг/мл рекомбинантного GM-CSF (Origio, Denmark) – опытная группа (EG) и стандартной комбинации сред, используемой в лаборатории Центра «ЭКО» ИРМ: ISM1™ + BlastAssist® (Origio, Denmark), без добавления цитокинов – контрольная группа (ISM1+ВА). Концентрация рекомбинантного GM-CSF 2нг/мл была выбрана производителем по результатам проведенных исследований на мышиных эмбрионах и ооцитах человека [12,15,34,35].

Оплодотворение ооцитов проводили стандартными методами ЭКО/ИКСИ, через 3±1 ч после получения их на ТВП. Культивирование ооцитов/эмбрионов проводилось в инкубаторах SANYO, VAROLAB (6%СО2) и миниинкубаторах PLANER (6%СО2, 5%О2, 89%N2) при T 37,1оС в соответствии с рекомендуемыми параметрами рН культуральных сред (EG 7.20; IVF 7.30-35; ISM1 7.22 -7.25; BA 7.35-40). Для непрерывного мониторинга за параметрами рН сред в инкубаторах использовалась система неинвазивного контроля pH Online™ OCTAX Log&Guard™ (MTG, Germany).

Оценка эмбрионов выполнялась через фиксированные промежутки времени: 20, 44, 68 ± 1 ч после оплодотворения. Перенос эмбрионов в полость матки в контрольной и опытной группах осуществляли на 3-й день культивирования в средах UTM™ и EmbryoGen® (Origio, Denmark), соответственно.
Анализ на ХГЧ проводился на 12-14 день после проведения переноса эмбрионов. При положительном результате (ХГЧ+), через 10 дней проводилось ультразвуковое исследование для визуализации плодного яйца.

Результаты исследования оценивались по следующим параметрам: частота наступления клинической беременности на перенос, частота имплантации и процент ранних потерь беременностей. Достоверность эффектов оценивали с использованием t-критерия для трех степеней свободы при сравнении разности между выборочными долями [2].

Результаты исследования и обсуждение


В таблице 1 представлены результаты культивирования эмбрионов в среде EmbryoGen с добавлением GM-CSF у пациенток с предыдущими неудачными попытками ВРТ в анамнезе. Средний возраст пациенток составил 34,5±3,5 и 34,2±5,9 лет в контрольной и опытной группе, соответственно. Среднее количество зрелых ооцитов, полученных на ТВП в группе ISM1+ВА 5,2 и 5,8 в группе EG. В контрольной и опытной группах средний балл на перенос составил 2,3 и 2,5, при максимальной оценке 3,5 балла, среднее количество эмбрионов на перенос отличалось незначительно и составило 2,7 и 2,9, соответственно.

Результаты анализа эффективности культивирования эмбрионов в среде с добавлением GM-CSF показали, что частота наступления клинической беременности (ЧКБ) и частота имплантации (7 нед. гестации) в группе EG были выше и составили 39,1% (18/46) и 20,4% (21/103), соответственно, против 27,8% (42/151) и 11,6% (42/362) в группе ISM1+ВА. Проведенное исследование показало, что частота прогрессирующих клинических беременно

КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ЭМБРИОНОВ В СРЕДЕ, СОДЕРЖАЩЕЙ  ГРАНУЛОЦИТАРНО-МАКРОФАГАЛЬНЫЙ КОЛОНИЕСТИМУЛИРУЮЩИЙ  ФАКТОР (GM-CSF) У ПАЦИЕНТОК С ПРЕДЫДУЩИМИ НЕУДАЧНЫМИ  ПОПЫТКАМИ ВРТ В АНАМНЕЗЕ


стей (12 нед. гестации) была достоверно выше в группе культивирования в среде EmbryoGen, по сравнению со стандартной комбинацией сред.

(ISM1+ВА) и составила 17,4 % (18/103) против 9,1% (33/362), соответственно. Также в опытной группе у пациенток с предыдущими неудачными попытками ВРТ в анамнезе при культивировании эмбрионов в среде с GM-CSF частота ранних потерь беременностей до 12 недель гестации была ниже и составила 16,6% (3/18) против 21,4% (9/42) в контрольной группе, данные недостоверны.

На протяжении всего процесса доимплантационного развития в репродуктивном тракте эмбрион подвергается воздействию цитокинов и ростовых факторов. Они оказывают регулирующее влияние на все этапы репродуктивного процесса, начиная от созревания фолликулов и заканчивая имплантацией эмбрионов. GM-CSF является трофическим фактором для эмбрионов и помогает им в процессе имплантации [29]. Наличие исходных иммунных дисфункций может быть серьезной причиной низкого качества ооцитов, дефекта оплодотворения яйцеклетки, нарушения развития и в конечном итоге, отсутствия или потери беременности. Недостаточная продукция GM-CSF может нарушить индукцию Т-клеточной толерантности в начале беременности и нарушить имплантацию как при естественной беременности, так и после программ ВРТ [22].

Многочисленные результаты исследований на эмбрионах млекопитающих, результаты доклинических проверок и данные о здоровье детей, появившихся на свет, в ходе многоцентрового рандомизированного контролируемого двойного слепого исследования параллельных групп подтвердили безопасность добавления рекомбинантного GM-CSF в среды для культивирования [14,19,36]. Результаты проведенного исследования показывают, что культивирование эмбрионов в среде EmbryoGen с добавлением рекомбинантного GM-CSF положительно сказывается на эффективности проведения циклов ВРТ у пациенток различных возрастных групп.

В ходе исследования родилось 358 детей, 194 появились после культивирования эмбрионов в среде EmbryoGen. Было показано, что между опытной и контрольной группой не наблюдалось различий в весе новорожденных, частоте врожденных пороков развития и сроках родоразрешения. В результате исследования культуральных сред для ВРТ была подтверждена эффективность культивирования эмбрионов в среде EmbryoGen с добавлением 2нг/мл рекомбинантного GM-CSF. Исследование достоверно показало, что результативность циклов ЭКО/ИКСИ при культивировании эмбрионов в среде с GM-CSF повышается ЧКБ 29,3% против 24,8% в контроле.

Оплодотворение, культивирование и перенос эмбрионов в среде EmbryoGen снижает частоту ранних потерь беременностей (до 12 нед. гестации) по сравнению с системой стандартного культивирования в контрольной группе 22,9% против 33,5%, соответственно. В подгруппе пациенток со спонтанным прерыванием беременностей в анамнезе эффективность применения среды EmbryoGen оказалась наиболее высокой.

У пациенток в данной группе результатом культивирования эмбрионов в среде с GM-CSF стало достоверное увеличение ЧИ на 44% (25% против 17%, в контроле), частоты прогрессирующих клинических беременностей на 40% (23,2% против 16,5%, в группе контроля) и увеличение частоты рождения детей на 28% (26,9% против 23,1%, соответственно). При культивировании эмбрионов в среде EmbryoGen у пациенток со спонтанным прерыванием беременности в анамнезе отмечено достоверное снижение частоты ранних доклинических потерь беременности (биохимическая беременность) 3,8% против 20,4% по сравнению с контрольной группой [36].

Полученные нами данные согласуются с результатами ряда авторов, в которых описывается, что культивирование эмбрионов человека в среде EmbryoGen® с добавлением 2 нг/мл рекомбинантного GM-CSF (Origio, Denmark) может улучшить ЧКБ и ЧИ у женщин с предыдущими неудачными попытками ВРТ и ранними потерями беременностей в анамнезе. Так, ЧКБ по результатам ретроспективного анализа 350 завершенных циклов у пациенток с ранними потерями беременностей в предыдущих попытках ВРТ составила 20,3% (29/143) в опытной группе (EG), против 18,8% (36/192) в контроле.

При этом было отмечено достоверное снижение частоты ранних потерь беременностей до 12 недель в группе EG, по сравнению с группой контроля 13,8 против 44,4%, соответственно [28]. У пациенток с предыдущими неудачными попытками ВРТ в исследовании Sfontouris et al., было показано, что среднее количество зрелых ооцитов полученных на ТВП составило 4,6 против 4,0, процент нормального оплодотворения 61,7 против 51,8, среднее число эмбрионов на перенос 2,3 против 2,4, в сравнении опытной и контрольной групп соответственно.

По результатам культивирования эмбрионов в среде с добавлением GM-CSF частота наступления клинической беременности и частота имплантации (7 нед. гестации) в группе EG были выше и составили 35,3% (12/34) и 17,4%, соответственно, против 22,9% (8/35) и 11,4% в группе контроля. Несмотря на то, что статистически достоверных данных в этом исследовании не получено, авторы полагают, что добавление GM-CSF в среды для культивирования эмбрионов позволяет увеличить ЧКБ и ЧИ у пациенток с предыдущими неудачными попытками ВРТ [33].

В результате применения среды, содержащей GM-CSF для культивирования ооцитов и эмбрионов, у 31 пациентки в возрасте от 28 до 44 лет (средний возраст 35,7±4,6) с неудачными попытками ВРТ или неразвивающейся беременностью в анамнезе, на ТВП в среднем было получено 4,1 ооцита MII, при этом число эмбрионов на перенос составило 1,9. Беременность наступила у 14 (45,2%) пациенток, частота имплантации составила 23,8%. Все беременности оказались одноплодными. У 2 пациенток была диагностирована неразвивающаяся беременность на сроке 8-9 недель [1].

Предполагается, что применение сред для культивирования эмбрионов с добавлением GM-CSF позволяет завершить беременность рождением здорового ребенка, это происходит благодаря наличию цитокинов, как важных включений для нормального развития эмбриона, роста и дифференцировки трофобласта и внутриклеточной массы, а также участия в регуляции процесса имплантации и иммунного ответа материнского организма. Все это позволяет открывать новые возможности для дальнейшего применения цитокинов и факторов роста в создании сред для культивирования эмбрионов человека [21,29,30,35].

Выводы


Сравнительный анализ эффективности культивирования эмбрионов человека в среде EmbryoGen показал, что культивирование эмбрионов пациенток с предыдущими неудачными попытками ВРТ в среде с добавлением GM-CSF увеличивает частоту наступления клинической беременности по сравнению с контролем и составляет 39,1% против 27,8%, соответственно. При этом было отмечено, что частота имплантации (7 нед. гестации) и частота прогрессирующих клинических беременностей (12 нед. гестации) были достоверно выше в группе культивирования эмбрионов среде EmbryoGen, по сравнению со стандартной комбинацией сред и составили 20,4% и 17,4% против 11,6% и 9,1%, соответственно.

Присутствие в культуральной среде GM-CSF обеспечивает нормальный рост и развитие эмбрионов, регулирует взаимодействие эмбрионов с клетками эндометрия, повышает адгезию и пролиферацию трофобласта. Полученные нами данные согласуются с результатами ряда авторов и показывают, что добавление в культуральную среду рекомбинантного GM-CSF приближает культивирование эмбрионов человека in vitro к естественным условиям, способствует улучшению имплантации и может положительно сказываться на эффективности проведения программ ВРТ.

ЛИТЕРаТУРА:

Костромина Н. Ю., Гордеева В. Л., Монахова И. В., Здановский В. М. Применение среды EmbryoGen для культивирования ооцитов и эмбрионов. Материалы XXIII международной конференции «Репродуктивные технологии сегодня и завтра». Волгоград 2013; с. 53-54
Плохинский Н. А. Биометрия. Новосибирск: СО АН СССР 1961; с. 364
Радзинский В. Е., Димитрова В. И., Майскова И. Ю. Неразвивающаяся беременность. М: ГЭОТАР-Медиа 2009; с. 200
Сеидова Л. А., Яворовская К. А. Паракринные регуляторы имплантации (обзор литературы). Проблемы репродукции 2010; 3: с. 7-10
Сидельникова В. М., Сухих Г. Т. Невынашивание беременности: Руководство для практикующих врачей. М: МИА 2010; с. 536
Судома И. А., Маслий Ю. В. Алгоритм обследования и лечения пациентов с многократными неудачными программами ВРТ. Материалы XVII международной конференции «Репродук­тивные технологии сегодня и завтра». Казань 2007; с. 20-21
Chaouat G., Menu E., Delage G. Immunoendocrine interactions in early pregnancy. Human Reproduction, 1999; 10: p. 55-59.
Coulam C. B., Acacio B. Does immunotherapy for treatment of reproductive failure enhance live births? Am J Reprod Immunol, 2012; 67(4): p. 296-304
Dumoulin J. C. et al. Effect of in vitro culture of human embryos on birthweight of newborns. Human Reproduction, 2010; 25(3): p. 605-612
Donaghay M., Lessey B. A. Uterine receptivity: alterations associated with benign gynecological disease. Semin Reprod Med, 2007; 25: p. 461-475
D’Hooghe T. M., Denys B., Spiessens C., Meuleman C., Debrock S. Is the endometriosis recurrence rate increased after ovarian hyperstimulation? Fertility and sterility, 2006; 86(2): p. 283-290
Elaimi1 A. and Harper J. C. The use of time-lapse imaging and FISH to study the effect of GM-CSF on dvelopment and aneuploidy in murine blastocysts. Human Reproduction, 2012; 27(2): p. 162-205
Laird S. M., Tuckerman E. M., Li T.C. Cytokine expression in the endometrium of women with implantation failure and recurrent miscarriage. Reproductive Biomedicine online, 2006; 13: p. 13-23
Robertson S.A. GM-CSF regulation of embryo development and pregnancy. Cytokine & Growth Factor Reviews, 2007; 18: p. 287-298
Scarpellini F. and Sbracia M. Effectiveness of GM-CSF 1 in the treatment of habitual abortion in a controlled study. Fertility and sterility, 2003; 80: p. 288
Scarpellini F. and Sbracia M. Use of granulocyte colony-stimulating factor for the treatment of unexplained recurrent miscarriage: a randomized controlled trial. Human Reproduction, 2009; 24(11): p. 2703-2708
Roth I. et al. Human placental cytotrophoblasts produce the immunosuppressive cytokine interleukin 10. J Exp Med, 1996. 184: p. 539-48
Hardy K., Handysid A. H. and Winston R. M. L. The human blastocyst: cell number, death and allocation during late preimplantation development in vitro. Development, 1989; 107: p. 597-604
Hansen M. et al. The risk of major birth defects after intracytoplasmic sperm injection and in vitro fertilization. N Engl J Med, 2002; 346: p. 725-730
Imakawa K. et al. Enhancement of ovine trophoblast interferon by granulocyte macrophage-colony stimulating factor: possible involvement of protein kinase C. Journal of Molecular Endocrinology, 1997; 19(2): p. 121-130
Kim D. et al. The supplementation of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) in culture medium improves the pregnancy rate in human ART programs. Fertility and sterility, 2001; 76(3): p. 6
Lim K. J. et al. The role of T-helper cytokines in human reproduction. Fertility and sterility, 2000; 73(1): p. 136-142
Levi-Setti P.E. et al. Implantation failure in assisted reproduction technology and a critical approach to treatment. Ann NY Acad Sci, 2004; 1034: p. 184-199
Laird S. M. et al. A review of immune cells and molecules in women with recurrent miscarriage. Human Reproduction Update, 2003; 9(2): p. 163-174
Makhseed M., Raghupathy R., Azizieh F. et al. Th1 and Th2 cytokine profiles in recurrent abortus with successful pregnancy and with subsequent abortions. Human Reproduction, 2001; 16(10): p. 2219-2226
Maher R. M. et al. Epigenetic risks related to assisted reproductive technologies: еpigenetics, imprinting, ART and icebergs? Human Reproduction, 2003; 18(12): p. 2508-2511
Perricone R. et al. GM-CSF and pregnancy: evidence of significantly reduced blood concentrations in unexplained Recurrent abortion efficiently reverted by intravenous immunoglobulin treatment. American Journal of Reproductive Immunology, 2003; 50(3): p. 232-237
Renzini M. M. et al. Clinical efficiency and perinatal outcome of ART cycles following embryo culture in the presence of GM-CSF in patients with miscarriage or early pregnancy loss history. Human Reproduction, 2013; 28(1): р. 142
Robertson S. A. GM-CSF regulation of embryo development and pregnancy. Cytokine & Growth Factor Reviews, 2007; 18: p. 287-298
Richter K. S. The importance of growth factors for preimplantation embryo development and in-vitro culture. Current Opinion in Obstetrics and Gynecology, 2008; 20(3): p. 292-304.
Sharkey A. M. et al. Sperm and seminal plasma differentially regulat cytockine and chemokine protein expression by human cervical epithelial cells. J Reprod Immunol, 2010; 86(1): р. 68
Sfontouris I. A. et al. Effect of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) on pregnancy rates in patients with multiple unsuccessful IVF attempts. Human Reproduction, 2013; 28 (1): р. 62
Segerer S. et al. Upregulation of chemokine and cytokine production during pregnancy. Gynecologic and Obstetric Investigation, 2009; 67(3): p. 145-150
Sjoblom C., Wikland M. and Robertson S.A. Granulocyte−macrophage colony-stimulating factor promotes human blastocyst development in vitro. Human Reproduction, 1999; 14(12): p. 3069-3076
Sjoblom C. et al. Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor alleviates adverseconsequences of embryo culture on fetal growth trajectory and placental morphogenesis. Endocrinology, 2005; 146(5): p. 2142-2153
Ziebe S. et al. A randomized clinical trial to evaluate the effect of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) in embryo culture medium for in vitro fertilization. Fertility and sterility, 2013; 99(6): р. 1600-1609




 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

  .  
 

Copyright (C) Репродуктивная медицина. Научно-практический журнал
г. Алматы, Алмалинский район, ул. Байтурсынова 79.
Тел.: +7 (727) 250 00 11, skype: medmedia.kz, e-mail: info@medmedia.kz
   
 
Яндекс.Метрика