ГЛАВНАЯ ЖУРНАЛЫ СОБЫТИЯ ИЗДАНИЯ КОНГРЕСС О НАС КОНТАКТЫ  

О результативности переноса размороженных бластоцист в протоколах медленной заморозки и витрификации
 
М. П. Яхъярова, Д. Н. Досалиева
M. P. Yahyarova, D. N. Dosaliyeva


Институт Репродуктивной Медицины, Центр «ЭКО», г. Алматы, (Казахстан)
Institute of Reproductive Medicine, IVF center, Almaty, (Kazakhstan)


Резюме


В статье представлены результаты применения протокола медленной заморозки бластоцист и витрификации (быстрая заморозка) с января по декабрь 2013 г. Полученные в результате исследования данные свидетельствуют о ряде преимуществ использования метода витрификации.

Summary


The article presents the results of the protocol slow freezing and vitrification of blastocysts, from January to December 2013. The resulting research findings suggest several advantages of using vitrification method.

Ключевые слова: витрификация, медленная заморозка, криоконсервация, бластоцисты.
Keywords: vitrification, slow freezing, cryopreservation, blastocyst.


Введение и актуальность исследований

Практический опыт применения медленной заморозки, развитие которого берет начало с 1977 года, обеспечил его статус как наиболее массового метода ВРТ в мировой практике ЭКО [1,2,3]. Большая клиническая практика и длительный период развития методики обеспечил высокий технологический уровень, проявленного в различных аппаратно-фармакологических и инструментально-регламентных отраслевых продуктах. Однако, при этом, принципиальная проблема медленной заморозки – высокая дегидратация клетки – сохранила значимость в оптимизации и улучшении своего решения [4].

С высокой долей вероятности это может быть основным фактором в относительно низкой результативности последующего выживания эмбрионов, которая в исключительных случаях превышала 70%, а в среднем составляла порядка 33-35% по отрасли в целом.

Наибольший вклад в теоретическое обоснование метода витрификации был внесен английским ученым К. Полге из Кэмбриджа [5]. С первой апробации в 1985 году, реализованной группой американских ученых во главе с В. Раллом, метод витрификации показал позитивную результативность по выживаемости клеточного материала [6]. В силу ряда факторов исследования по методу были прерваны. Возобновившиеся с 1993 года Каваямой работы по развитию метода в 10-летний период привели к практическому прецеденту успешной беременности [7,8].

С данного периода метод витрификации вошел в число практических клинических технологий с высокой динамикой годового роста. Основной проблемой витрификации является воздействие сложных криопротекторов на структуру живой клетки в процессах замораживания и последующей разморозки. При этом объективным преимуществом метода выступает высокая степень выживаемости эмбрионов, превышающей в среднем 90%, и отсутствие гормональной стимуляции cуперовуляции пациентки [9].

Наличие альтернативных методик в переносе эмбрионов в формах протокола медленной заморозки и витрификации обуславливает острую необходимость анализа и оценки их результативности в условиях реальной клинической деятельности. В данном аспекте настоящая работа является одной из числа пионерских исследований, посвященных анализу эффективности приведенных методов в казахстанской клинической практике ЭКО.

Цель исследований

Криоконсервация и перенос размороженных эмбрионов на сегодня является системной единицей сферы массовой клинической практики в деятельности Института Репродуктивной Медицины (ИРМ). При этом в клинической практике ИРМ задействованы распространенные методики «медленной заморозки» и витрификации. С большой вероятностью можно прогнозировать в ближайшей перспективе позитивную динамику роста использования в составе медицинских услуг ИРМ технологии криоконсервации как в «протоколе медленной заморозки», так и в методе витрификации.

В связи с этим, основной целью настоящего исследования является критический анализ и оценка сравнительной эффективности метода «медленной заморозки» и витрификации в условиях реальной клинической практике и методического обеспечения роста результативности ЭКО для пациентов ИРМ. При этом особое внимание было обращено вопросам детализации особенностей процесса криоконсервации, переноса размороженных эмбрионов и определение эффективности криопротоколов в программах ВРТ по следующим параметрам: выживаемость эмбрионов, частота клинических беременностей на перенос, частота имплантации.

Материалы и методы

Эмбрионы, оставшиеся после переноса и достигшие стадии бластоцисты, подвергались замораживанию. Данное производилось и для случая отмены переноса из-за развившегося синдрома гиперстимуляции яичников.

Исследованию подвергались результаты переноса размороженных бластоцист в период с января по декабрь 2013 г. Общее число циклов переноса криоконсервированных бластоцист составило 710 единиц по всему периоду. При этом, структура данной выборки переносов имела вид: 504 цикла были представлены в медленных протоколах, а 206 циклов – по методу витрификации. Вся выборка переносов сосредоточена в рамках деятельности Центра ЭКО ИРМ (г. Алматы).

Замораживание и размораживание эмбрионов по медленному протоколу проводилось в соответствии с протоколом, разработанным в 1996 году группой под руководством J. Tastert с применением 1,2 – пропандиола и сахарозы [10]. Для криоконсервации и оттаивания бластоцист применялся протокол «двух шагов» [11]. В качестве среды использовался фармакологический продукт компании Medicult (Дания). Для криоконсервации применялся программный замораживатель Freeze Control CL-8000 Cryologic.

Витрификация и оттаивание бластоцист были выполнены по технологии открытой витрификации в жидком азоте методами Cryotop и Cryotech [7,8]. При этом, перед криоконсервацией, независимо от метода, экспандированные и вылупляющиеся бластоцисты подвергались вспомогательному коллапсу.
Бластоцисты размораживали и инкубировали в среде культивирования в период 2-4 часа до переноса в полость матки.

Частота выживаемости рассчитывалась как отношение числа интактных эмбрионов к общему числу размороженных эмбрионов.
Блатоциста считалась интактной при сохранении целостности структур внутренней клеточной массы и трофэктодермы.

Результаты

Возраст пациенток в обеих группах был приблизительно одинаков: 34,7 – в группе с использованием мед

О  результативности переноса размороженных бластоцист в протоколах медленной заморозки и витрификации


ленного протокола, и 34,9 при использовании метода витрификации.
Среднее количество эмбрионов на перенос в двух протоколах – 1,8.

Обсуждение

Важным фактором для криоконсервации, без негативного влияния на эмбрион, является сохранение целостности мембран клеток. И функциями криопротекторов являются ослабление эффекта кристаллизации и препятствование слипанию и денатурации макромолекул [12,13,14]. Современные наборы сред для криоконсервации методом витрификации содержат оптимальный состав криопротекторов, позволяющий сохранить целостность и интактность эмбриона [13,15]. Также, в качестве объекта последующей детализации выявлен вопрос потенциала выживаемости эмбрионов.

Выводы

• Метод витрификации демонстрирует устойчивый тренд преимущества ряда показателей по сравнению с протоколом медленного замораживания;
• Использование метода витрификации позволяет максимально увеличить шансы на наступление беременности после ЭКО, уменьшить или предотвратить гибель нормальных жизнеспособных эмбрионов, оставшихся после цикла ЭКО;
• Актуальным вопросом устойчивого развития метода витрификации является усовершенствование техники повышения выживаемости эмбрионов.

Литература:

Edwards R. G., Steptoe P. C. The Relevance of the Frozen Storage of Human Embryos. Ciba Foundation Symposi 52. Elsevier. Excerpta Medica. North-Holland, 1977
Trounson A., Mohr L. Human pregnancy following cryopreservation, thawing and transfer of an eight-cell embryo. 1983, Nature, 305, 707-709
Zeilmaker G. H., Alberda A. T., van Gent I., Rijkmans C. M., Drogendijk A. C. Two pregnancies following transfer of intact freezing-thawed embryos. Fertility and Sterility, 1984, 42, 293-296
Гордиенко Е. А., Иткин Ю. А., Ишков Г. С. Кинетика обезвоживания клеток в многокомпонентных средах при наличии проникающего через мембрану вещества. Механизмы криоповреждений и криозащиты биологических структур. Киев: Наук, думка, 1977
Polge C. Low-Temperature Storage of Mammalian Spermatozoa. Royal Society of London, 1957, 147 (929): 498-508
Rall W. F., Fahy G. M. Ice-free cryopreservation of mouse embryos at -196 degrees C by vitrification. 1985, Feb 14-20, Nature, 313 (6003): 573
Kuwayama M., Vajta G., Kato O., Leibo S. P. Highly efficient vitrification method for cryopreservation of human oocytes. Reprod Biomed Online, 2005; 11: 3: 300-308
Katayama K., Stehlik J., Kuwayama M. et al. High survival rate of vitrified human oocytes results in clinical pregnancy. Fertil Steril, 2003; 223-224
Казарян M. Оптимизация метода ЭКО и ПЭ путем использования программы криоконсервации эмбрионов: автореф. дис. канд. мед. наук. М., 2005
Tasters J., Belaisch A. J., Lassale B. Factors influencing the success rate of human embryo freezing in in vitro fertilization and embryo transfer program // Fеrtil Steril. 1987
Kyrou D., Fatemi H. M., Blockeel C. Transfer of cryopreserved thawed embryos in hCG induced natural or clomiphene citrate cycles yields similar live birth rates in normo-ovulatory women // J. Assist. Reprod. Genet. 2010, Vol. 27 (12), р. 683-689
Corbacioglu A., Baysal B. Effects of endometrial thickness and echogenic pattern on assisted reproductive treatment outcome // Clin. Exp. Obstet. Gynecol. 2009, Vol. 36 (3), р. 145-147
Developmental prognosis for zygotes based on pronuclear pattern: usefulness of pronuclear scoring / Arroyo G. et al. // J. Assist. Reprod. Genet. 2007, Vol. 24 (5), р. 173-181
Usadi R. S. Temporal and morfologic characteristics of pinopod expression across the secretory phase of the endometrial cycle in normal cycling women with proven fertility // Fеrtil. Steril. 2003, Vol. 79, р. 970-974
Kuleshova L. L., MacFarlane D. R., Trounson A. O., Shaw J. M. Sugars exert a major influence on the vitrification properties of ethylene glycol-based solutions and have low toxicity to embryos and oocytes. Cryobiology, 1999; 38: 2: 119-130.





 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

  .  
 

Copyright (C) Репродуктивная медицина. Научно-практический журнал
г. Алматы, Алмалинский район, ул. Байтурсынова 79.
Тел.: +7 (727) 250 00 11, skype: medmedia.kz, e-mail: info@medmedia.kz
   
 
Яндекс.Метрика