ГЛАВНАЯ ЖУРНАЛЫ СОБЫТИЯ ИЗДАНИЯ КОНГРЕСС О НАС КОНТАКТЫ  

Корреляция уровня анеуплоидий в эмбрионах и мужских гаметах
 
А. И. Избасаров, В. В. Чистяков, В. В. Ладыгина, К. А. Какимова, А. Е. Чистякова
A. I. Izbasarov V. V. Chistyakov, V. V. Ladygina, K. A. Kakimova, A. E. Chistyakova


Многопрофильный медицинский центр Private Clinic Almaty, г. Алматы (Казахстан)
Multi-medical center Private Clinic Almaty, Almaty (Kazakhstan)


Резюме


В работе установлена корреляция между повышенным уровнем анеуплоидий сперматозоидов и процентом анеуплоидных эмбрионов после проведения преимплантационного генетического скрининга (ПГС).

Summary


In the article the correlation between the increased level of aneuploidy spermatozoon and percentage of aneuploidy embryos after preimplantation genetic screening (PGS) carrying out has been ascertained.

Ключевые слова: анеуплоидия, преимплантационный генетический скрининг, бесплодие, вспомогательные репродуктивные технологии, флуоресцентная in situ гибридизация (FISH).
Keywords: aneuploidy, preimplantation genetic screening, infertility, assisted reproductive technology, fluorescent in situ hybridization (FISH)


Актуальность проблемы

Известно, что у мужчин с нарушениями сперматогенеза риск рождения детей с хромосомной патологией гораздо выше, чем в популяции [1, 2]. Mehdi M. с соавторами показали в своих исследованиях, что у пациентов с разными видами патоспермии увеличивается процент анеуплоидий хромосом в ядрах сперматозоидов по сравнению с группой мужчин с нормоспермией [3, 4].

В работах Magli M. и Dubey A. сообщается о влиянии патоспермии на возникновение анеуплоидий в эмбрионах, полученных в результате программ ЭКО/ИКСИ [5]. В некоторых исследованиях приведены данные, которые доказывают, что отсутствие имплантации эмбриона и привычное самопроизвольное прерывание беременности связаны с повышенным уровнем анеуплоидии в гаметах [6]. В настоящее время наиболее информативным и доступным методом для определения анеуплоидии хромосом сперматозоидов является метод флуоресцентной in situ гибридизации (FISH).

В рамках концепции Приват-ЭКО всем пациентам с мужским бесплодием и нарушением сперматогенеза было рекомендовано пройти исследование для установления уровня анеуплоидий сперматозоидов. В случае повышенного уровня анеуплоидий в ядрах сперматозоидов супружеским парам рекомендовалось проведение преимплантационного генетического скрининга (ПГС) с целью выбора эуплоидных эмбрионов.

Цель исследования

Установить корреляцию между повышенным уровнем анеуплоидий в ядрах сперматозоидов и частотой хромосомных нарушений в эмбрионах супружеских пар, прошедших программу ЭКО.

Материалы и методы

В исследовании участвовали 37 супружеских пар с мужским либо комбинированным фактором бесплодия. Супружеские пары были обследованы и подготовлены к программе ЭКО в соответствии с Приказом и.о. Министра здравоохранения № 627 «Об утверждении правил проведения вспомогательных репродуктивных методов и технологий» от 30 октября 2009 года. Средний возраст мужчин составил 39,6 лет, средний возраст женщин 35,4. Всем пациентам было проведено стандартное цитогенетическое исследование, по результатам которого в исследуемую группу были отобраны супруги с нормальным кариотипом.

Всем мужчинам, вошедшим в группу исследования, был проведен анализ на установление уровня анеуплоидий в ядрах сперматозоидов с применением метода FISH. Проводилась оценка хромосом 18, X, Y. Фиксированные препараты клеток эякулята готовили по методу M.Guttenbach (1994 г.) [7]. Гибридизацию in situ проводили в соответствии с протоколом, рекомендуемым фирмой-производителем (Abbott Molecular, США). [8]. Подсчет сперматозоидов и анализ флуоресцентных сигналов проводили при увеличении 100×10 с использованием микроскопа AxioImager.Z2 (Zeiss, Германия) с программным обеспечением Ikaros (MetaSystems, Германия).

В каждом случае проводился подсчет не менее 500 сперматозоидов с интактной морфологией головки и хвоста. Показанием для проведения ПГС являлись тяжелые нарушения сперматогенеза и/или повышенный уровень анеуплоидий. Биопсию проводили на 3-и или 5-ые сутки развития всем пригодным для биопсии эмбрионам. ПГС проводили строго по 7 хромосомам (13,16,18,21,22,Х,Y) в соответствии с протоколом, рекомендуемым фирмой-производителем [8].

Результаты

Все супружеские пары были поделены на три группы исследования, в соответствии с уровнем анеуплоидий в ядрах сперматозоидов у мужчин. Данные проведенного анализа представлены в таблице 1. С учетом нарушений сперматогенеза во всех случаях была произведена процедура ICSI. Количество эмбрионов с нормальным оплодотворением в среднем составило 92,1%, что значимо не различалось в разных исследуемых группах. Контроль дробления осуществлялся с применением технологии покадровой фотосъемки эмбрионов – Time Lapse в системе PrimoVision, при культивировании с пониженным содержанием кислорода О2 (5%), что позволило сделать морфологический отбор эмбрионов, пригодных к биопсии для дальнейшего проведения преимплантационного генетического скрининга.

Приоритетной была биопсия эмбрионов на 5-ые сутки развития. Культивирование эмбрионов с применением новых технологий, биопсия на 5-ые сутки развития и подсчитанный процент анеуплоидных эмбрионов позволили подтвердить сделанный нами в предыдущих работах вывод о том, что морфология эмбриона зачастую не коррелирует с генетикой. Так, процент бластуляции в первых двух группах составил 78,2% и 76,1 % соответственно, в третьей был снижен (71,1%), но статистически незначительно. Данный факт еще раз подтверждает необходимость проведения ПГС у пациентов с повышенными генетическими рисками.

Корреляция уровня анеуплоидий в эмбрионах и мужских гаметах


Следует отметить, что по результатам преимплантационного генетического скрининга наблюдалась корреляционная связь между уровнем анеуплоидии сперматозоидов и числом анеуплоидных эмбрионов. Наиболее частыми хромосомными патологиями были трисомия 21 хромосомы (51 эмбрион, 24,6% от общего числа) и моносомия 16 (36 эмбрионов, 17,3% от общего числа), а также численные нарушения половых хромосом (32 эмбриона, 15,4% от общего числа). Количество анеуплоидных эмбрионов в группе пациентов с высоким уровнем анеу-плоидий было значительно выше по сравнению с группой, где процент анеуплоидий не превышал, либо превышал незначительно нормальные показатели (таб. 1).

Частота наступления беременности составила 50/43,7/40% соответственно в трех исследуемых группах. Отмена переноса по результатам ПГС состоялась в 9/11,1/37,5% всех случаев. Из чего можно предположить, что незначительное различие в частоте наступления беременности связано с переносом эуплоидного эмбриона по исследуемым хромосомам. Тогда как процент отмены переноса по результатам ПГС четко коррелирует с повышением уровня анеуплоидий сперматозоидов.

Следует подчеркнуть, что среди пациентов с установленным высоким уровнем анеуплоидий (более 5% при норме 1,4%) были 4 супружеские пары, отказавшиеся от проведения преимплантационного генетического скрининга. В отдельную группу для анализа данные пары включены не были по причине недостаточной выборки. Однако, отсутствие беременности во всех четырех случаях возможно следует отнести к аргументам, подтверждающим актуальность данного исследования.

Выводы

Таким образом, установлена корреляция между повышенным уровнем анеуплоидий сперматозоидов и процентом анеуплоидных эмбрионов после проведения ПГС. Данный факт позволяет сделать вывод о том, что в группе пациентов с нарушениями сперматогенеза и повышенным уровнем анеуплоидий проведение преимплантационного генетического скрининга позволит снизить генетические риски и увеличить шансы на наступление беременности.

Литература:

Alan R. Thornhill, Karen S. Molecular diagnostics in preimplantation genetic diagnosis. J Mol Diag 2002;4:1:11-29
Айламазян Э.К. (ред.). Материалы XXV научной сессии НИИ акушерства и гинекологии. М 1996-1997;17-19
Кулаков В.И., Леонов Б.В. (ред.). Экстракорпоральное оплодотворение и его новые направления в лечении женского и мужского бесплодия (теоретические и практические подходы): Руководство для врачей. 2-е изд., доп. М: МИА 2004;782
Staessen C., Hortournaye H., Michiels A. et al. PGD in 47,XXY Klienfelter’s syndrome patients. Human Reprod 2003;9:4:319-330
Sarah E.D., Sean P.F., Colin D.M. Detection of chromosomes and estimation of aneuploidy in human spermatozoa using in situ hybridization. Mol Human Reprod 1997;3:7:585-598
Magli M.C., Gianaroli L., AP et al Patemal contribution to aneuploidy in preimplantation embryos. Reprod Biomed Online 2009; 18(4) 536-42
Dubey A. Dayal M.B., Frankfurter D. et al. The influence of sperm morphology on preimplantation genetic diagnosis cycles outcome. Fertil. Steril. 2008, 89(6) 1665-9
FISH chromosome search technology by Abbott Molecular





 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

  .  
 

Copyright (C) Репродуктивная медицина. Научно-практический журнал
г. Алматы, Алмалинский район, ул. Байтурсынова 79.
Тел.: +7 (727) 250 00 11, skype: medmedia.kz, e-mail: info@medmedia.kz
   
 
Яндекс.Метрика